湖南医科大学学报 2000年第2期第25卷 基础医学

铱来铬青蓝R分光光度法测定人发中痕量铜

作者：程新园　黎志宏

单位：程新园(有机物理化学教研室　长沙　410078)；黎志宏(第二附属医院医务科　长沙　410011)

关键词：分光光度测定法；铱来铬青蓝R；铜；类风湿性关节炎；毛发

［摘要］　利用在醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH6.0）中Cu²⁺与铱来铬青蓝R形成紫红 色络合物 的显色反应，建立了一种新的测定痕量铜的分光光度法。该络合物的最大吸收波长为565 nm ，摩尔吸光系数为8.25×10⁵ L^.mol^-1.cm^-1，Cu²⁺在0～0.48 μg^.ml^-1范围内服从比尔 定律。该法灵敏度高，操作简便，用于正常人及类风湿性关节炎患者头发中的痕量铜分析， 结果发现，类风湿性关节炎患者发铜含量明显高于正常人。
［中图分类号］O656.31［文献标识码］A［文章编号］1000-5625(2000)02-0117-02

Spectrophotometric determination of copper in the hair of
the patients with rheumatoid arthritis

CHENG Xin-yuan
(Department of Chemistry, Hunan Medical University　Changsha 410078)
LI Zhi-hong
(The Second Affiliated Hospital， Hunan Medical University　Changsha 410011)

［Abstract］　A new color reaction of copper (II) with s olochrome cyanine R was s tudied by spectrophotometry. The results were that in the pH6 of HAc- N aAc buffer solution solochrome cyanine R reacted with copper (II) to form a vio let complex； the maximum absorption of the complex was at 565 nm and its appare nt molar absorption coefficient was 8.25×10⁵ L^.mol^-1.cm^-1. Beer 's Law was obeyed in the range of 0～0.48 μg^.ml^-1. This method was used to determine copper level s in the hair samples of 5 normal persons and 5 rheumatoid arthritis patients. The resu lts showed that the hair copper level of arthritis patients was significantly hi gher than that of normal persons （P＜0.01）.
　　［Key words］　spectrophotometry；　solochrome cyanine R；　copp er；　rheumatoid arthritis；　hair

　　 铜是人体必需的痕量元素，参与造血过程和多种生理及代谢过程，与酶的合成、机体的免疫 功能有密切关系。许多研究证明，贫血、肿瘤、类风湿性关节炎等疾病患者血清铜和发铜增 加^［1］ 。人体内铜量的变化与某些疾病有重要关联。测定发铜含量对某些疾病的诊 断具有重要意义。
　　国内外对铜的吸光光度法的研究较多^［2～5］，但铱来铬青蓝R与Cu²⁺显色 反应的研究及应用尚未见报道。作者发现，在醋酸-醋酸钠缓冲介质中，以Triton X-100 作活化剂，铱来 铬 青蓝R与Cu²⁺形成紫红色络合物。笔者研究了该显色反应的适宜条件，用于测定正常 人及类风湿性关节炎患者发铜含量，获得满意结果。

1　材料与方法

1.1　仪器　723型分光光度计系上海第三分析仪器厂生产； BYT-120型石 英亚沸蒸馏器；PHS－3C型酸度计系浙江萧山科学仪器厂生产；501型超级恒温器系重庆试验 设备厂生产。
1.2　试剂　（1）Cu²⁺标准溶液：准确称取分析纯CuSO₄^.5H₂O 0 .3930 g 溶于石英亚沸水，于100 ml 容量瓶中定容，即配成含Cu²⁺1.0000 mg^.ml^-1 标准溶液。使用时，用亚沸水稀释成含Cu²⁺10.0μg^.ml^-1 工作液。（2）0.5 g^.L^-1铱来铬青蓝R水溶液。（3）pH6.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。（4）1%Triton X-100水溶液。（5）5%KF水溶液（调pH至6.0）。
1.3　样本来源　取自我校第二附属医院内科病人发样。从发根用不锈钢剪刀 紧贴头皮，剪取枕部头发2～3 cm，取约0.5 g，剪成约0.5 cm长段，洗净，烘干待用。
1.4　样本处理　称取0.5000 g发样，用HNO₃ 10ml浸泡4 h后，加热至溶 液呈红色，再加 入HClO₄ 1 ml，继续消化至溶液为无色澄清，加热至近干，冷后用亚沸水定容为25 ml作 待测液。
1.5　实验方法　在25 ml比色管中，依次加入一定量试样（Cu²⁺ 0～1 2 μg），KF1ml， 摇匀，醋酸-醋酸钠缓冲溶液3 ml，铱来铬青蓝R 1 ml，Triton X-100水溶液1 ml，亚沸 水 稀释至刻度，摇匀。立即置80 ℃恒温槽中恒温反应30 min。取出，流水冷却3 min，在723 型分光光度计上于565 nm处，以试剂空白为参比，用1 cm比色皿测定溶液吸光度。

2 结果与讨论

2.1　吸收曲线　按实验方法测定试剂空白和络合物的吸收曲线（图1）。测 出试剂空白的吸收峰在517 nm处，络合物最大吸收峰在565 nm处。

图1　试剂空白（1）和 络合物（2）的吸收曲线
　　Fig.1　Absorption curve of reagent bla nk（1） and 12 μg Cu²⁺ color reaction system （2）

2.2　条件试验
2.2.1　缓冲介质及用量的影响　试验表明，盐酸，硫酸作介质不太理想，用pH6.0的 醋酸-醋酸钠缓冲溶液较好，当其用量为3 ml时，吸光度值稳定。
2.2.2　铱来铬青蓝R用量的影响　铱来铬青蓝R 1 ml足以使12 μg Cu²⁺ 显色完全。增加用量，则底液太深。
2.2.3　表面活性剂Triton X-100用量的影响　试验表明，加入Triton X-1 00时，吸光度值显著上升，用量为1 ml时，吸光度值稳定。
2.2.4　加热时间及络合物稳定性　该显色体系随温度升高而吸光度增加。当 80 ℃恒温反应30 min时，显色完全，吸光度恒定不变。
2.3 标准曲线　按实验方法取不同量的Cu²⁺进行实验，绘制标准曲线 （图2）。Cu量在0～0 .48 μg^.ml^-1范围内符合比尔定律，回归方程为 A=0.12067+1.29825 C （C为Cu 2+μg^.ml^-1），r=0.9927。由直线斜率计算出其摩尔吸光系数 ε₅₆₅=8.25× 10⁵ L^.mol^-1.cm^-1。

　　图2　标准曲线
Fig.2　Calibration curve for Cu²⁺

2.4　共存离子的影响　试验表明，取6 μg Cu ²⁺按实验方法进行干扰离子试验，Na⁺，K⁺， Cl^-，Ac^-及F^-可大量存在而不干扰测定。而100倍的Ag⁺和NO₃^-，50倍的Zn ²⁺，20倍的Pb²⁺， Au³⁺，Hg²⁺，Ca²⁺及CO₃^2-，10倍的Mg²⁺，1倍的Fe ³⁺ 和Al³⁺干扰实验；5% KF1ml可消除Fe³⁺ 和Al³⁺的干扰。
2.5　头发样品分析　5例正常人及5例类风湿性关节炎患者头发样品中痕量铜的平均值分别为　 17.62 μg图1　试剂空白（1）和 络合物（2）的吸收曲线 system （2）g^-1，相对标准偏差分别为4.5%和3.0%。头发样 品中每次加入Cu ²⁺4 μg ，加标回收率均在95%～105%之间，类风湿性关节炎患者发铜明显高于正常 人，两组 差异显著（P＜0.01）。该研究结果为类风湿性关节炎疾病的诊断及发病机制的研究 提供了重要依据。

参考文献：
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［2］　San 　Andres MP，Marina ML. Spectrophotometric 　determination of copper(Ⅱ)，ni ckel（Ⅱ） and cobalt（Ⅱ） as complexes with sodium diethyldithiocarbamate in c a tionic micellar midium of hexadecyltrimethylammonium salts［J］. Talanta, 1994, 41(2):179-185.
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［4］　王宇飞，沈　涛. 5-（3-羧基苯偶氮）-8-氨基喹啉光 度法测定铜［J］. 冶金 分析，1998，18（5）：12-14.
［5］　敖登高娃，魏方. 混合表面活性剂存在下二溴羧基荧光酮光 度法测定痕量铜［J］. 分析科学学报，1998，14（3）：228-230.

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